Identificação molecular, susceptibilidade aos antifúngicos e inibição fotodinâmica antimicrobiana no gênero Malassezia

Sumario: O gênero Malassezia agrupa 14 espécies de leveduras lipofílicas e/ou lipodependentes, presentes na microbiota indigena humana e de animais, envolvidas na patogenese da pitiríase versicolor, dermatite seborréica e da otite, esta ocorrendo em animais. O tratamento convencional das malassezioses baseia-se em antifúngicos sendo frequente a ocorrência de recidivas. A inibição fotodinâmica antimicrobiana (aIFD) tem mostrado potencial para embasar alternativas terapêuticas viáveis. No presente trabalho, realizou-se a identificação molecular específica de amostras de Malassezia (41 amostras de humanos e 10 de cães), a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de seis antifúngicos (caspofungina, cetoconazol, clotrimazol, isoconazol, itraconazol, miconazol) e a aplicação da aIFD empregando dois fotoabsorvedores (Azul de ortotoulidina e substância C) e fontes de luz emitindo em 630nm (vermelho) e 430nm (azul). Tentativas de agrupamento prévio das amostras com base na similaridade genetica por PCR fingerprinting com o iniciador (GTG)5 foram ineficazes na tipagem de espécies. Sucessivamente, 34 amostras foram identificadas por sequenciamento empregando-se os iniciadores NL1/NL4 a partir da região D1D2 do gene ribossômico. O sequenciamento revelou 7 espécies: M. furfur, M. globosa, M. pachydermatis, M. slooffiae, M. sympodialis, M. yamatoensis e M. japonica. Esta é a primeira descrição da ocorrência dessas duas últimas espécies na América Latina. Os resultados de determinação das CIM mostraram valores elevados para caspofungina (>16 g/mL) sugestivos de resistencia natural. Os valores de CIM50 e CIM90 obtidos para as demais drogas foram, de modo geral, mais elevados do que os registrados na literatura para espécies de Malassezia spp. Para M. furfur, estes valores (CIM50 e CIM90) foram: cetoconazol – 0,25 e 2 g/mL; isoconazol – 4 e 16 g/mL; itraconazol – 0,125 e 8 g/mL; para o clotrimazol e o miconazol foram obtidos os mesmos valores de 2 e 16 g/mL. Para o gênero Malassezia essas concetrações foram: cetoconazol – 1 e 16 g/mL; isoconazol – 8 e 16 g/mL; itraconazol – 0,125 e 16 g/mL; o clotrimazol – 8 g/mL e 64 g/mL; miconazol – 4 g/mL e 16 g/mL. O cálculo da equivalência molar das concentrações efetivas das drogas testadas demonstrou ser o itraconazol a droga mais eficiente. Nos modelos de aIFD o tratamentos dos grupos com a luz vermelha e a luz azul pemitiram uma redução da viabilidade celular de Malassezia sp. em 1,4 Log10 UFC/mL e de 1,7 Log10 UFC/mL, respectivamente